陽性菌實驗室的探討

陽性菌實驗室（以下簡稱陽性菌室）是微生物實驗室的重要組成部分，是保證微生物檢驗工作順利進行的重要載體。隨著職能調(diào)整和技術規(guī)范的不斷完善，對陽性菌室的要求和管理也日趨完善。
一、陽性菌室的功能
陽性菌室是與活菌操作有關的實驗區(qū)域。實現(xiàn)的主要功能包括：
（1） 菌株的分離、純化、接種和傳代；
（2） 工作菌液的制備；
（3） 增菌培養(yǎng)物或陽性污染物中致病微生物的分離和提純；
（4） 陽性對照實驗操作及陽性培養(yǎng)；
（5） 已知、未知或疑似微生物的鑒定和確認。
為防止可能的微生物交叉污染，應設立獨立的細菌室和真菌室，嚴禁在陽性菌室從事無菌取樣、無菌備品的準備、供試品溶液的制備、樣本貯藏等實驗活動。
二、相關技術規(guī)范
（1）《藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則》（中國藥典 附錄ⅪⅩ Q）
（2）《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》GB 50346
（3）《實驗室生物安全通用要求》GB 19489
（4）《人間傳染的病原微生物名錄》衛(wèi)科教發(fā)[2006]15號
（5）《食品安全微生物學檢驗 總則》GB 4789.1等。
依據(jù)以上技術規(guī)范要求，藥品檢測實驗室（包括食品、保健食品、化妝品）使用的質控菌及檢測出的致病菌，如沙門菌、銅綠假單孢菌、金黃色葡萄球菌、腸桿菌等，均屬于危害程度第三類，大量活菌操作及陽性樣本分離純化等操作應在二級生物安全實驗室內(nèi)進行，因此陽性菌室應滿足國家標準GB 19489中二級生物安全實驗室的相關要求。
三、硬件要求
微生物實驗室須按微生物檢驗工作流程合理布局潔凈區(qū)、活菌區(qū)（生物安全區(qū)）以及輔助準備區(qū)，保證檢驗過程運行順暢，無交叉，無混淆。陽性菌室須按照生物二級實驗室建筑技術規(guī)范設計，配備生物安全柜保證保護環(huán)境和操作人員安全，配備洗眼器或應急噴淋裝置保證應急事故發(fā)生時對操作人員的緊急救助。
四、軟件管理
除上述硬件要求外，為防止交叉污染，確保檢測結果準確，陽性菌室應建立嚴格的管理制度。主要包括：
（1）《陽性菌室生物安全管理制度》，對陽性菌室出入、生物 安全柜使用、人員防護、活菌操作、廢棄物處理、風險評估等作出規(guī)定，此外還要明確意外事故的應急處置程序。
（2）《陽性菌室清潔消毒規(guī)程》，規(guī)定清潔周期、消毒方式和頻次、消毒劑的種類、效果評價等。
（3）《生物安全柜使用及維護規(guī)程》，規(guī)定生物安全柜使用、維護規(guī)程、性能確認的程序。
（4）《實驗用菌株的管理制度》，規(guī)定實驗菌種購買、復蘇、活化、傳代、使用、保藏、銷毀及記錄等。
綜上，陽性菌室（二級生物安全實驗室）應嚴格按國家相關規(guī)定進行設立、使用及管理，確保人員、環(huán)境、樣品安全及檢測結果準確可靠。
附加內(nèi)容：
陰性對照實驗區(qū)、陽性對照實驗區(qū)共用人流物流通道未能有效嚴格區(qū)分，易出現(xiàn)交叉污染。且在《藥品檢驗所實驗室質量管理規(guī)范》(試行)在第十八條：無菌檢查室與陽性對照室應嚴格分開。
在GMP檢查中的2802條項中明確規(guī)定：無菌檢查室不得與陽性對照室使用同一實驗室。條項解釋中提到“無菌室和陽性對照室不可公用更衣室及緩沖間，防止污染無菌室”。
再結合《醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設計規(guī)范》（GB50457-2008）5.1.13條第2款：各類實驗室的設置，應符合下列要求：
1）陽性對照、無菌檢查、微生物限度檢查和抗生素微生物檢定等實驗室，以及放射性同位素檢定室等應分開設置。
2）無菌檢查室、微生物限度檢查室應為無菌潔凈室，其空氣潔凈度等級不應低于10000級，并應設置相應的人員凈化和物料凈化設施。
《藥品微生物學檢驗技術》一書中提到：現(xiàn)代微生物學實驗室應基本滿足下列要求：
（1）具有開展無菌檢查、微生物限度檢查、無菌采樣等嚴格分開的、環(huán)境潔凈度均為10000級、局部100級潔凈室。
（2）抗生素微生檢定、抗菌作用測定等實驗應各自有分開的半無菌實驗室。并與無菌檢查、微生物限度檢查的實驗室嚴格分開，注意防止抗生素污染引起的實驗結果假陰性。
（3）單獨分開的細菌培養(yǎng)室、霉菌培養(yǎng)室。